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CO-IP检测/WB检测/ChIP/免疫组化/免疫荧光威斯腾生物

银牌供应商 

技术服务信息

服务名称:CO-IP检测/WB检测/ChIP/免疫组化/免疫荧光
服务类别:免疫学服务 - 免疫组化/免疫沉淀/Western blot
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:重庆.重庆
更新时间:2021/11/30 10:39:00
浏览人数:6525
服务商:威斯腾生物
诚信指数:1874点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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威斯腾生物
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重庆高新区生物医药研发产业园D栋
邮编:
400039
电话:
4006756758
传真:
023-65316016
联系人:
张老师
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技术服务详细描述

CO-IP检测/WB检测/ChIP/免疫组化/免疫荧光


CO-IP检测

免疫共沉淀(Co-IP)主要原理是将纯化的抗体直接固定在琼脂糖基质上,从细胞裂解的液或其他复杂混合物中分离天然蛋白复合体。免疫共沉淀是研究蛋白:蛋白相互作用的一种常用方法,即利用抗体去免疫沉淀特定抗原(诱饵蛋白)并且共沉淀任何于该抗原相互作用的蛋白(目的蛋白)。

免疫共沉淀操作步骤

1、 4℃保存的抗体固定柱,4℃ 1500 X g 离心 1min,弃滤液;

2、加入200μl IP裂解液洗涤离心柱,4℃ 1500 X g 离心 1min,弃滤液;

3、加入200μl预冷的 PBS洗涤离心柱,4℃ 1500 X g 离心 1min,弃滤液,于纸上吸干柱头液体,塞紧塞子;

4、加入(使用对照琼脂糖树脂预处理细胞裂解液:4)保存的滤液,拧紧盖子,4℃孵育3.5h;

5、安装收集管,取下并保留塞子,旋松盖子,4℃ 1500 X g 离心 1min,保留滤液;

6、加入200μl预冷的 PBS洗涤离心柱3次,4℃ 1500 X g 离心 1min,弃滤液;

7.安装收集管,向离心柱中树脂斜面加入10μl Elution Buffer,1500 X g 离心 1min,保存滤液;加入50μl Elution Buffer,室温放置5min,1500 X g 离心 1min,保存滤液。


WB检测

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。

主要实验步骤如下: 

总蛋白提取

1)组织剪切成细小的碎片。每100mg组织加入1mL RIPA裂解液。用玻璃匀浆器匀浆20次。 

 (2)将匀浆物转移到1.5 mL离心管。12,000rpm,4 oC离心5min,吸取上清,即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。 

蛋白浓度测定(BCA测蛋白浓度)

检测样品的测定

检测样品测定时,同 BSA 标准品溶液同时进行测定。

1)分别取100 μL检测样品(稀释100倍)加入到微孔板中,每个样品取2个平行样进行测定。

(如果必要,也可选择与BSA标准品溶液相同的稀释方法稀释检测样品后测定)                        

2)加入100 μL工作液后,立即混匀。

3)37℃水浴中反应60min后,冷却至室温。

4)酶标仪波长设定在562nm 处进行测定。用水校零。尽可能在20min内检测完毕所有样品。

5)各样品溶液的吸光度值减去Blank值的平均值,根据标准曲线计算出检测样品的蛋白浓度。     

SDS-PAGE电泳

1)将长短玻璃板对齐后按照方向放入制胶夹中卡紧,然后垂直卡在制胶架子上准备灌胶。

2)配制15%和10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将胶加至适量高度(绿线附近)后,轻柔加上双蒸水压胶。

3)当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝了。再等3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用滤纸将水吸干。

4)配制5%的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。

5)待浓缩胶凝固后,将含胶的玻璃板加入电泳夹卡紧,放入电泳槽(电极红对红,黑对黑)。


染色质免疫共沉淀(ChIP

染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)是研究蛋白质与DNA相互作用的经典实验方法。它是基于体内分析发展起来的方法,能真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白,是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的最好方法。随着新一代测序技术的成熟与发展,整合了染色质免疫共沉淀与高通量测序技术的ChIP-Seq,是研究目标靶蛋白与DNA相互作用的又一技术突破,可应用于组蛋白特异性修饰位点、转录因子结合位点等的研究。

技术特点

全基因组覆盖: ChIP-Seq可在全基因组范围对蛋白结合位点进行筛选与鉴定

高灵敏度:每个样本可获得数百万条的序列标签,可发现研究基因组上稀有的蛋白结合位点

高精确率:可获得高水平的信噪比数据,准确区分真实事件与噪音,精确定位蛋白结合位点

高性价比:仅需较少的数据量即可鉴定全基因组范围内的结合位点


免疫组化(IHC)

免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)


免疫荧光

免疫荧光染色:主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白,主要包括蛋白和一抗结合,其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗,在激光共聚焦系统下即可观察到荧光。染色程序分为两步,第一步,用已知未标记的抗体(Anti LC3II)加到未知抗原样本上;第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgGIgM抗体(Anti Alexa Fluor 647)。如果第一步发生了抗原抗体反应,荧光标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定抗原。

我公司可以提供单标、双标及三标的免疫荧光服务。


威斯腾实验服务流程



威斯腾生物服务项目

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分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型
SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒包装实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
BioPlex悬浮芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
生长因子芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
炎症因子芯片软骨细胞培养体内血栓模型
血管生成因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
凋亡因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
趋化因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片基因编辑动物
电生理相关服务动物整体实验服务
膜片钳实验
细胞生物学检测高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研设计指导&文章评估/润色
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测药物筛选服务项目药效学评价
旷场实验高通量自动药物筛选平台抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测细胞高内涵药物筛选平台心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测蛋白质组学靶标研发平台泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳分子药理研究平台内分泌系统药物药效学评价
生物膜片钳药物筛选平台抗炎免疫药物药效学评价
常规药物体外筛选

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务! 
【全国免费热线】400-675-6758
【电话】 023-65316016,023-65316556
【邮箱】 china-western@163.com
【官网网址】
【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼   


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  Western Blotting   [供应商:上海迪奥生物科技有限公司]
  免疫组化实验   [供应商:武汉博士德生物工程有限公司]
  Western blot 免疫印迹实验   [供应商:复医生科科研服务中心]
  免疫组化(ihc)技术服务   [供应商:上海拜力生物科技有限公司]
  免疫共沉淀(Co-IP)   [供应商:上海玉华生命科技发展公司]
  免疫印迹 Western blot   [供应商:上海捷兰生物技术有限公司]
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